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紫菜体细胞的培养

2010-10-11   来源: 中国海带紫菜网   编辑: 中国海带紫菜网   评论:

紫菜体细胞培养不同于传统方法,它必须在温度适宜下,在一定营养成分的培养液中,经过良好的光照条件才能正常分化发育。
  (1)体细胞培养方式:常用的有平面培养与悬浮培养两种方式

紫菜体细胞培养不同于传统方法,它必须在温度适宜下,在一定营养成分的培养液中,经过良好的光照条件才能正常分化发育。
  (1)体细胞培养方式:常用的有平面培养与悬浮培养两种方式:平面培养是将体细胞按一定量投放于培养箱或培养池中进行培养;悬浮培养是用培养瓶或一定尝试的池子,将一定量的细胞投入,用搅拌器不断促进水流动,细胞始络悬浮于水中也可以用通气管加以通气,造成水的流动,两种方式培养,均需要密切注意培养条件和加强管理。
  (2)体细胞培养条件:培养的条件有培养液的配制,海水比重的调整、光照、培养的温度、通气、营养盐、换水等。
   ①培养液配制:培养两种紫菜的体细胞均是用MES培养液,这是修订的ES培养液,先配成浓的母液,然后在培养的海水中加入一定量的母液而成。待培养1周后可不加此母液,仅加N9氮肥)和P(磷肥)亦可。
  ②海水比重:培养开始,先用比重为1.030的海水培养8小时以后,可加入1.020左右海水稀释到1.027,再过8小时,再稀释到1.025,最后可稀释到1.023。以后一直用一般海水培养。这样逐渐降低比重的目的,是为了避免刚酶解的体细胞因骤然降低比重而引起剧烈渗透压改变,而使细胞死亡的现象。
  ③光照条件:刚酶解出的细胞投入培养,开始可以不见光,一天后可见弱光500勒克斯,3天内逐渐加强到1000勒克斯左右。到一周左右可加强到2000-3000勒克斯光时以12:12小时为宜,如利用自然光时,需避免直射或初期培养的强光。
  ④培养温度:两种紫菜体细胞的培养温度以20±2℃为最适宜,因此培养体细胞唯一需要特殊的条件和海带育苗室一样,要有恒温设备。尤其是在9月初水温受气温影响,一天中变化大,无恒温控制容易引起培养失败。如果9月下旬到10月上旬,在江苏沿海培养条斑紫菜体细胞时,因自然气温下降到23℃左右,这时也可进行常温培养,不需恒温设备。
  ⑤营养盐:除了用MES培养液外,在培养数天后,还需补加氮(N)肥4ppm,磷(P)肥1ppm。
  ⑥通气:在固定式或悬浮培养过程中,勇气是非常重要的,尤其后者水体深,通气尤为重要,否则细胞极易死亡。但通气大小亦应适度,气泡太大易伤害细胞; 气泡太小细胞又易沉淀。因此在体细胞培养中的通气标准,也是一项应该研究的内容,目前尚无定论,仅凭经验办事。
  ⑦换水:在培养过程中换水是很重要的,从培养第四天起,每天应换水一部分。首先先使细胞沉淀,抽取上面旧水,然后加入等量海水,如果海水不充足,亦可隔天换水,但不可一次换的太多,新加的海水,必须经过消毒。
  ⑧管理:体细胞培养,时间虽不长,但也需要加强管理,健全管理规则,切不可粗枝大叶,管理内容除上述①至⑦项外,每天应在上午抽取样品进行镜检,计算细胞成活率和生长发育情况。如发现异常现象,应采取措施以加以抢救或改善。 
 

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